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細胞培養(yǎng)步驟及注意事項

發(fā)布日期: 2020-02-10
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細胞培養(yǎng)步驟:

1.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

準備F-12K培養(yǎng)基(F-12K : GIBCO,貨號:21127-022);北美胎牛血清,10%; PS 1%。

培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。

凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。

2.細胞處理:

復(fù)蘇細胞:將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢 查細胞密度。

細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

注意事項:

收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染, 請立即與我們聯(lián)系。

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作, 并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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