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技術(shù)文章
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技術(shù)文章
2019-815
一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`sMEM的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`sF12也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規(guī)含有無機(jī)鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12這兩種培養(yǎng)基各取1/2，形成神經(jīng)生物學(xué)通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM，現(xiàn)應(yīng)用于快速生長的細(xì)胞，同MEM含有相同的營養(yǎng)成分，但濃度高...
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早期建立iPS細(xì)胞的方法為：利用逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)表達(dá)4個Yamanaka因子,然后將細(xì)胞在ES細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng),再用抗性基因篩選多潛能性相關(guān)啟動子的激活，如Oct4和Nanog啟動子，在得到細(xì)胞形態(tài)相似的iPS細(xì)胞后，鑒定iPS細(xì)胞的多潛能性。這些方法構(gòu)建iPS細(xì)胞的效率很低,細(xì)胞多潛能性不均一,而且有內(nèi)在安全問題,如病毒的插入突變c-Myc的致癌性,使其仍無法應(yīng)用于臨床治療。為解決這些安全問題和提高iPS細(xì)胞建系的效率,人們從多方面改進(jìn)構(gòu)建iPS細(xì)胞。1.轉(zhuǎn)座子技術(shù)英國和加拿...
查看更多2019-814
污染是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中面臨的主要問題，某些污染的發(fā)生往往難以察覺及檢測，而且污染源能長期共存于培養(yǎng)體系中。常見污染情況有：1.細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力是否足夠，尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象?？稍谂囵B(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理2.霉菌：培養(yǎng)液是...
查看更多2019-813
儲存溫度生物樣本的長期儲存通常使用盡可能低的溫度來降低樣本內(nèi)的生化反應(yīng)提高樣本內(nèi)各種成分的穩(wěn)定性。生物大分子、細(xì)胞、組織和器官的常用儲存溫度有-80℃(超低溫冰箱),-140℃(液氮?dú)庀嗷蛏罾浔?以及-196℃(液氮液相)，溫度越低樣本的穩(wěn)定保存時(shí)間越長。0～-60℃是水的結(jié)晶溫度，容易對細(xì)胞和組織的微觀結(jié)構(gòu)造成傷害，一般不使用這一溫度來保存組織和細(xì)胞。部分經(jīng)過提純的生物大分子可以在0～-60℃穩(wěn)定保存一定時(shí)間，但在組織樣本內(nèi)生物大分子受到細(xì)胞組織內(nèi)多種因素的影響，穩(wěn)定性有...
查看更多2019-85
在細(xì)胞培養(yǎng)中?？梢姷郊?xì)胞及培養(yǎng)液中有一些大小不等、形態(tài)不同的黑色顆粒在運(yùn)動。如果鏡下檢查(100x)每視野計(jì)數(shù)在10個以上者就可能使細(xì)胞生長受到影響，如果其數(shù)量再增多細(xì)胞可停止增殖繼而死亡。人們常稱這種顆粒為黑膠蟲或中毒顆粒。?關(guān)于黑膠蟲的描述ü分類上的描述對于黑膠蟲的分類，學(xué)術(shù)界沒有明確給予說法。關(guān)于黑膠蟲的分類，目前大部分人認(rèn)為黑膠蟲污染是微生物感染。在一些文章論述上把黑膠蟲歸為生物污染類型，但是沒把它歸為確定的生物分類類型，只是把黑膠蟲獨(dú)立為一種未知生物。而根據(jù)中國病毒...
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